NanoPhotometer®

操作和处理

我的样品的预期浓度值太高或过低。建议采用哪些步骤来排除故障?

请使用被水或70%乙醇湿润的无尘纸清洁您的点样头和盖子。为了避免解冻的影响,要确保样品已经达到室温,并在测量前充分混匀。我们建议使用纯化的样品,以避免干扰的杂质也在感兴趣的区域有吸收。
确保您的移液器经过校准,并使用适当的枪头。请检查您是否为您的样品选择了正确的应用程序(例如:dsDNA、RNA、oligo)。确保样品上样量与所选择的光程对应 (稀释15/0.67 mm光程的最小上样量为1 µL。稀释140/0.07 mm光程最小上样量为0.3µL)。注意:0.07 mm的光程长度(相当于稀释140)不应用于浓度小于100 ng/µL的样品。

浓度结果是自动转换的吗,我还需要做额外的手动计算吗?

在“核酸浓度测定”和“UV法蛋白测定”中,以及在浓度、标准曲线和蛋白质分析中的应用中,所得浓度值被自动计算。A260或A280的值也将显示在这6个应用程序中。在所有其他方法中,吸光度值(相当于10 mm光程)将被提供。

在使用UV法测量蛋白质之前,是否有必要对蛋白样品进行纯化处理?

是的,吸光度的测量并不针对特定类型的蛋白质。其他在280 nm处有吸收的分子的存在也会影响测量结果(更多信息,请看下面的问题:“我的样本显示200-300 nm范围内有较高的吸光度,是什么原因造成的?)。对于细胞粗提物,建议进行比色分析—例如:Bradford或者BCA。

在测量前是否有必要对核酸样品进行纯化处理?

是的,吸光度的测量并不针对特定类型的核酸。其他分子也在260 nm处有吸收,这对实验结果有影响。

用无尘纸清洁点样头和盖子的表面足够了吗?

是的,建议用无尘纸清洁点样窗口表面。如果使用粘性或难以清洗的样品,可以使用去超纯水湿润的无尘纸擦拭。如果需要,70%的乙醇或异丙醇也可用于清洁。

是否可使用其他特殊溶剂或腐蚀性物质?

通常,点样头的表面是具有很强的惰性。但是,建议不要在仪器上使用强酸或强碱。对于特殊溶剂兼容性的问题,请联系Implen支持团队在用户手册和这里都可以找到兼容溶剂的列表。.

Implen软件也能在我的Mac上运行吗?

是的,Implen软件可以在基于Windows和Mac的计算机上操作。

NanoPhotometer® 需要一台电脑或者笔记本电脑操控吗?

Implen NanoPhotometer®系列产品的设计具有极大的灵活性。您可以购买一个集成显示器作为独立的一体机或着通过USB连接计算机进行控制。也可以通过智能手机或平板电脑进行控制。

我的核酸样品的理想缓冲液是什么?

DNA最适合在碱性pH值下溶解,它应该储存在碱性缓冲液中,例如,10 mM的Tris-HCl(pH: 8.0–8.5),包括不含脱氧核糖核酸酶的水,以防止酸性水解。对于长期储存,建议增加1 mM的EDTA以抑制核酸酶的活性,另外,可利用醋酸钠-乙醇沉淀。RNA应储存在微酸性缓冲条件下(pH:4.0-5.0)以防止亲核自攻击。缓冲溶液最好是用新鲜的无核糖核酸酶的水,并储存在-80℃中。

我能使用超纯水作为缓冲液吗?

由于水的pH值会受到空气中的CO2溶解的影响,2 建议不要单独使用(超)纯水作为缓冲液。

在含有EDTA的缓冲液中储存DNA会影响我的下游应用吗?它是否会影响我的光谱测量?

为了获得最佳的PCR结果,由于EDTA是二价螯合剂,不应用于PCR缓冲液中,抑制酶活性。另外,EDTA在230nm附近吸收,会影响样品的260/230比。

我的样品在200-300 nm之间有很高的吸光度,这可能是由什么引起的?

—尿素、EDTA、碳水化合物、苯酚、盐酸胍以及肽键在200到230 nm之间有吸收
— TRIzol在230到270 nm之间有吸收
—异硫氰酸胍在260 nm处有吸收
—高浊度样品可以用320 nm处的吸光度来表示
—脂肪酸在200到300 nm之间有吸收
—NDSBs在230到270 nm之间有吸收
—RIPA在250到290 nm之间有吸收
—Triton X-100在250到300 nm之间有吸收

请参考技术应用-蛋白质篇查看更多信息

建议采取哪些步骤来测试以往的样品是否有交叉污染或残留?

清洁点样头后,点空白并将空白作为样品测定。如果没有检测到浓度(水平的测量线为零)则点样头是完全干净的。如果显示浓度结果,请重复清洁过程。建议用含70%乙醇润湿的无尘纸适当去除粘性大或高浓度的蛋白质样品。

C40和NP80可以用何种比色皿?

可以使用任何厂家生产的任何种类(石英、玻璃或塑料)的比色皿。以下的光程长度可以调节设置:10, 5, 2, 1和0.5毫米。对于微量比色皿,需要兼容Z-中心高度为8.5毫米。

在N120上是否可以在单通道和多通道模式之间切换?

所有应用程序都有单通道模式。多信道模式只有在核酸检测和UV法测定蛋白质应用中才有,在这里它被设定为默认。在参数选择面板有一个切换开关,可激活单通道模式。

可以选择哪些样品ID以及如何调样品数据表格?

可能的样品ID包括空白(BLK)、对照(CTR)和样品(SPL)。从屏幕上的数据表格中,可以通过点击想要选择的样品ID窗口,选择样品ID,然后点击Set ID来选择。可以通过选择行或列(行或列将显示为白色)来编辑样品ID,然后按照前面的步骤设置样品ID。

样品数据表格如何导入/导出,使用何种文件格式?

csv文件用于预定义样品数据表格。用户可以通过选择行和列并设置样品ID来定义。从文件目录中导入样品数据表格(例如:从USB闪存驱动器,NanoPhotometer®中)点击ID,然后导入并选择所需的样品数据表格。样品数据表格的导出,是通过在NanoPhotometer设备上进行预定义,然后点击ID并选择导出。必须选择一个指定的文件夹以保存样品数据表格。

空白测量是必须的吗?

在测量样品之前,必须进行空白测量。如果样品数据表格中不包括空白ID,空白测量是仍是需要的。此时,空白测量将被列为“隐形空白”。空白测量在样品数据表格中不可见,但在结果表中将被显示。

终身精度

Implen NanoPhotometer®的测量准确性如何?

Implen NanoPhotometer®确保终身准确性。两个光程15和140是固定的锚点,永不改变。专利样品压缩技术防止样品蒸发。每次测量的偏差小于±3%—取决于样品的性质等等。

测量结果的重复性如何?

Measurements of a single sample without pipetting a fresh sample onto the system allow a maximum deviation of 0.003 Abs (fluctuation of the lamp).

我需要重新校准Implen NanoPhotometer®吗?

Implen NanoPhotometer®免校准并且免维护。每次启动都有一个自动的自我校准。

光源的寿命是多长?

Implen NanoPhotometer®使用脉冲氙灯。光源的寿命大约是10年 (109 闪烁)。光源在其寿命内不会改变强度。

如果Implen NanoPhotometer®开机,氙灯光源一直开启吗?

不。光源仅在测量期间(当闪烁时)处于活动状态。如果您全天打开Implen NanoPhotometer®,光源并不会有衰减。

内置的旋涡振荡器是否会影响Implen NanoPhotometer®的性能和光学性能/稳定性吗?

内置的旋涡振荡器是一种特殊设计的低速旋涡振荡器,对仪器的性能没有任何影响。放置在Implen NanoPhotometer®旁边的一个标准振荡器产生的震动比内置低速旋涡振荡器更多。

CFR21软件

哪一种NanoPhotometer®型号与CFR21软件兼容?

NanoPhotometer®型号N120, NP80, N60和C40与CFR21软件兼容。 N50与上一代NanoPhotometer®, NanoPhotometer® P-Class和Pearl系列不兼容。

CFR21软件包包含什么?

CFR21软件包包括符合21 CFR Part 11的软件和仪器IQ/OQ。CFR21软件包提供了具有密码保护、电子签名、数据完整性、安全性和审计追踪功能的基于角色的访问控制。根据NanoPhotometer®的型号IQ/OQ软件包包括一个液体和/或固态的NIST二级标准品。所有二级标准品均附带认证证书。

哪些基于角色类型的帐户是可用的,它们有如何不同?

有三种角色:管理员、高级用户和普通用户。管理员可以完全访问具有所有权限的所有文件夹、数据、审计跟踪和用户帐户。高级用户可以访问其定义组中的文件夹和数据。普通用户是最有限的角色,可以访问其指定文件夹和子文件夹中的数据。

我在哪里可以访问审计追踪?

只有管理员可以通过电脑在CFR21的偏好选项下查阅审计追踪。可以在偏好选项中通过电脑和NanoPhotometer®直接保存和打印审计追踪。

我该如何创建网络文件夹?

必须为每个用户帐户设置一个唯一的网络文件夹。用以太网线连接NanoPhotometer®到计算机,选择偏好,CFR21。在“帐户”下选择指定用户后,选择“网络文件夹”。网络路径的设置如下://IP/share/path。可以在网络设置中找到IP地址。用户必须输入其Windows/Mac用户名和密码,并单击磁盘图标以保存设置。网络状态将改为已连接。

我如何看到数据保存在哪里?

在选择保存数据的文件目的地时,文件目录将在窗口顶部右边显示。

我可以更改我的密码吗?

是的,密码可以在偏好中更改。选择CFR21,帐户,选择所需的登录名。在这里您可以输入一个新的登录密码。

我在哪里可以找到未保存的数据?

所有测量的数据将自动保存在自动保存文件夹长达10天。

“自动保存”文件夹中的文件在10天后没有被删除,它们将被移动到自动保存存档文件夹中。自动保存文件永远不会自动从“自动保存存档”文件夹中删除;它们将保留在“归档”文件夹中,直到执行手动备份或删除操作。只有管理员可以访问自动保存/自动保存存档文件夹。

我可以更改存储结果和存储方法中文件夹的顺序吗?

文件夹按字母顺序显示,与用户帐户权限无关。

我该如何通过以太网访问计算机上的结果?

通过局域网从Windows计算机进入NanoPhotometer®的目录时,请在Windows文件资源管理器中输入超微量分光光度计的序列号或IP((\\序列号或者 \\IP地址),并点击回车键进行确认。对于Mac OS X系统,打开OS X Finder查找器的“转到”菜单中的“连接到服务器”对话框,输入仪器序号或激活NanoPhotometer® 在服务器地址字段中的连接IP地址。用户对文件夹的访问根据分配的用户权限受到限制。文件夹有密码保护,并且您需要NanoPhotometer® 登录名和密码以便访问文件夹。

CFR21软件是一个封闭的还是开放的系统?

CFR21软件被设计为一个封闭的系统。封闭系统指的是一个系统访问由系统上负责电子记录内容的人控制的环境。

过去的NanoPhotometer®® 型号

操作和处理

我的样品的预期浓度值太高或过低。建议采用哪些步骤来排除故障?

请使用被水或70%乙醇湿润的无尘纸清洁您的微量比色杯和盖子。为了避免解冻的影响,要确保样品已经达到室温,并在测量前充分混匀。我们建议使用纯化的样品,以避免干扰的杂质也在感兴趣的区域有吸收。
确保您的移液器经过校准,并使用适当的枪头。
请检查您是否为您的样品选择了正确的应用程序(例如:dsDNA、RNA、oligo)。请检查Lid factor是否与相应的盖子对应,以及稀释因子是否为所需的值(默认值为1.000)。检查您使用的盖子是否在正确的浓度范围内工作,并且上样量与所定义的量相关(请见平均检测范围表)。

如果我不知道样品的浓度,我应该使用哪一个盖子呢?

这取决于您的样品,如果浓度一般在200 ng/µl以下,您可以从Lid 10开始。对于更高浓度的探测范围,总是从Lid 50开始,因为它复盖了最宽的探测范围。请在应用表格中找到每个稀释盖子的浓度范围:“平均检测范围和所需样品量”。如果浓度不在所用盖子的检测范围内,则会显示警告信息,表明“吸光度过高”或“吸光度过低”。请查看NanoPhotometer® 用户手册了解详细的信息。

为什么仪器没有显示盖子警告信息?什么时候会出现?

您的仪器可能使用旧版本的软件。请通过软件更新使用最新版的软件。您可以从我们的下载页面下载到最新版本的软件。您的 NanoPhotometer® 可根据实际盖子去识别样品的浓度是否过高或过低。您可以决定是否要切换到一个更理想的盖子,还是继续使用当前的盖子。如果您需要帮助,请不要犹豫与我们的支持团队取得联系。

结果是自动转换的,还是需要用盖子的倍数来乘它们?

在“NanoVolume Applications”和“Cuvette Applications”的应用中,数值结果是自动计算。在所有其他方法中,只有路径长度被记录,而不是计算。您必须自己处理这些数据。

在测量前是否有必要对核酸样品进行纯化处理?

是的,吸光度的测量并不针对特定类型的核酸。其他分子也在260 nm处有吸收,这对实验结果有影响。

用无尘纸清洁超微量比色皿和盖子的表面足够了吗?

是的,防划伤的石英表面避免物质粘在点样台或盖子的镜子上。我们建议用稍微湿润的无尘纸清洁擦拭,以避免在石英表面有棉絮残留。

是否可使用其他特殊溶剂或腐蚀性物质?

通常,超微量比色皿和盖子的表面是具有很强的惰性。但是,建议不要在仪器上使用强酸或强碱。对于特殊溶剂兼容性的问题,请联系Implen支持团队(support@implen.de)。在用户手册和这里都可以找到兼容溶剂的列表。

PVC软件可以在我的Mac上用吗?

不可以。PVC软件只能在基于Windows系统上运行。

我购买了带有PVC软件的NanoPhotometer® P-Class。哪里可以找到我的仪器访问代码?

访问代码可以在Implen活页夹的内部或在仪器的背面找到。

NanoPhotometer® 需要一台电脑或者笔记本电脑操控吗?

NanoPhotometer®是被设计成一体机的仪器。但是,您可以通过USB,蓝牙或者SD RAM卡去传输数据。软件与配件可选择性购买。

最新的软件版本是否与以前的所有NanoPhotometer®兼容?

最新的PVC软件和固件可以与所有版本的NanoPhotometer®兼容。最新的PVC软件和固件可在网上查到: http://implen.com/nanophotometer/downloads.php

终身精度

Implen NanoPhotometer®的测量准确性如何?

Implen NanoPhotometer®确保终身准确性,因为没有影响产品性能的可移动的部件。专利样品压缩技术防止样品蒸发。每次测量的偏差小于±5%—取决于样品的性质等等。

测量结果的重复性如何?

对单个样品的测量且不重新上样时,允许最大偏差为0.005 Abs(光源的波动)。

我需要重新校准Implen NanoPhotometer®吗?

Implen NanoPhotometer®免校准并且免维护。每次启动都有一个自动的自我校准。

光源的寿命是多长?

Implen NanoPhotometer®使用脉冲氙灯。光源的寿命大约是10年 (109 闪烁)。光源在其寿命内不会改变强度

如果Implen NanoPhotometer®开机,氙灯光源一直开启吗?

不。光源仅在测量期间(当闪烁时)处于活动状态。如果您全天打开Implen NanoPhotometer®,光源并不会有衰减。

内置的旋涡振荡器是否会影响Implen NanoPhotometer®的性能和光学性能/稳定性吗?

内置的旋涡振荡器是一种特殊设计的低速旋涡振荡器,对仪器的性能没有任何影响。放置在Implen NanoPhotometer®旁边的一个标准振荡器产生的震动比内置低速旋涡振荡器更多。

OD600 DiluPhotometer™

OD600 DiluPhotometer™比色皿正确的方向是什么?

OD600 DiluPhotometer™的光路以8.5毫米的中心高度从上/下的方向通过。

使用DiluCell™比色皿时的上样体积是多少?

DiluCell™ 10需要200µL样品量。 DiluCell™ 20需要100µL样品量。

DiluCell™

为什么我使用DiluCell™测量样品时的度数有波动?

首先检查DiluCell™比色皿中是否有气泡,正确的移液技巧将避免气泡的产生。并且,要确保DiluCell™比色皿紧密卡在比色皿槽中。如果DiluCell™可以自由移动,那么倾斜的方向可能导致反射进而影响吸光度读数。

使用DiluCell™比色皿时的上样体积是多少?

DiluCell™ 10需要200µL样品量。 DiluCell™ 20需要100µL样品量。

我可以使用DiluCell™用于除了OD600的其他应用吗?

是的, DiluCell™可以进行340-1100nm范围内的所有光谱分析应用。Implen已认可DiluCell™和OD600 DiluPhotometer™分光光度计搭配使用。请联系Implen了解更多DiluCell™的扩展应用。

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